紫外分光光度(UV)法是通過被測物質在紫外光區的特定波長或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。紫外光譜是物質在200～400 nm的近紫外光區和400～800 nm的可見光區的吸收光譜。UV圖提供兩個重要數據：吸收峰的位置和光吸收強度。由于藥物分子中多含有紫外光區的生色基，因此紫外分光光度法廣泛應用于藥品檢驗。
 
     使用UV法應注意以下環節：
    儀器的校正和檢定：
     1．1 波長： 
     由于溫度變化對機械部分的影響，儀器的波長經常會略有變動，因此除應定期對所用的儀器進行全面校正檢定外，還應于測定前校正測定波長。
     1．2 吸收度 吸收度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。
     1．3 狹縫寬度 
     選擇儀器的狹縫寬度，應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，對于《中國藥典》UV法測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會偏低。
     1．4 天平和玻璃儀器的檢定：所用的容量儀器及分析天平應經過檢定，如有偏差應加上校正值。
     1．5 吸收池配對：

     石英吸收池對紫外光亦有吸收，1 em的吸收池在波長220～270 nm的范圍內，以空氣作為100％，其透光率往往小于100％，同時每個吸收池不可能完全相同，故在每次測定前應做吸收池配對試驗。方法是取干燥潔凈的吸收池，均裝入測定用空白溶劑，以一只吸收池作空白，用測定時所用的波長測定其他吸收池的吸收度，最后選擇吸收最小的一只作為配對，測定并記錄下其它吸收池的吸收度，供試品液的實際吸收度應是與吸收池(有空白溶劑時)吸收度之差。為減少誤差，常用一個配對杯測定若干樣品(也減少計算麻煩)，但應注意換液時充分洗滌。

     對溶劑的要求：

     由于溶劑與溶質分子間形成氫鍵、偶極化等的影響，可以使溶質吸收波長發生位移。通常極性溶劑比非極性溶劑的影響大，在選擇溶劑時應予以注意。測定供試品前，應先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否有吸收峰，是否影響供試品測定。每次測定時應采用同一廠家、同一批號的試劑配制混合均勻的同一批溶劑。

     3 檢驗：
     3．1 溶液配制：
     稱量應按藥典規定進行。配制測定溶液時稀釋轉移次數應盡可能少，轉移稀釋時所取容積一般應不少于5mL。含量測定供試品應稱取2份，如為對照品比較法，對照品也應稱取2份。吸收系數檢查也應稱取供試品2份，平行操作。每份結果對平均值的偏差應在4-0.5％以內。作鑒別或檢查時可取樣品1份。
     3．2 測定： 
     除另有規定外，應在規定的吸收峰波長4-2 nm以內，再測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰最大波長應在該品種項下規定的波長4-1nm以內，否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的準確度。取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側。樣品溶液的量以池體積的4／5為宜，使用揮發性溶液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應無殘留溶劑，為防止溶劑揮發后溶質殘留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放人樣品室時應注意每次放入的方向相同。使用后用洗滌劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存。吸收池如污染不易洗凈時可用發煙硫酸+硝酸(3：1 )混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表面，并應充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。
     3．3 讀數：
     一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間為宜，吸收度在此范圍誤差較小。